简介：

氧化型谷胱甘肽(GSSG)是谷胱甘肽(GSH)的氧化形式，又称为二硫谷胱甘肽，是两分子的谷胱甘肽氧化面成。GSSG会被谷胱甘肽还原酶还原成GSH，因此机体中大多数是以还原型形式存在。测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。

试剂盒组分:

本试剂盒可用于检测细胞、组织、血浆、血清、红血球、等样品。

样本处理:

1. 血清样品:将收集于血清分离管中的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1,000×g 离心15分钟，取上清即可，将上清置于≤-20℃冷冻保存，避免反复冻融。

2. 血浆样品:用 EDTA或肝素钠抗凝管采集标本，并将标本在采集后的 30 分钟内于 4℃冰箱，1,000×g 离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于≤-20℃冷冻保存，避免反复冻融。

3. 组织匀浆:
A、在预冷 PBS(0.01mol/L， pH=7.0-7.2)中清洗去除血液，低温切割标本后，准确称取组织重量。

B、按重量(g):体积(mL)=1:9的比例，加入9倍体积的匀浆介质PBS。用手工或匀浆器将标本充分匀浆。

C、3000 ×g离心15分钟，仔细收集匀浆上清，弃沉淀，（如需要可取部分进行BCA蛋白定量），≤-20℃以下保存。

4. 细胞裂解液:在分析试验之前，细胞需利用以下方法处理:
A、贴壁细胞应该用冷 PBS 轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，于 1,000×g 离心 5 分钟后收集，(悬浮细胞通过离心直接收集)，将收集到的细胞用冷 PBS 洗3次。

B、用 PBS 稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万/ml 左右。通过超声破碎或反复冻融方式，以使细胞破坏并放出细胞内成份。3000 ×g离心15分钟，仔细收集上清，≤-20℃冷冻保存。

5. 细胞培养上清或其它生物体液标本:请 3,000×g 离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于≤-20℃冷冻保存，避免反复冻融。

二、检测步骤：

1 、可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至412nm, 分光光度计蒸馏水调零。

2、试剂二:有毒易挥发试剂，涉及该试剂的步骤建议在通风橱内操作。

3 、试剂三放置37℃，水浴保温30min。

4、试剂五:临用前加入 2.5 mL 蒸馏水，溶解后-20℃分装可保存4周，避免反复冻融。

5、试剂六工作液:先将试剂六内液体离心至底部，后用移液枪吹打混匀使用。临用前根据样本数量按照试剂六:

蒸馏水=1uL:20uL(21uL，约10T)的比例配制备用，现用现配。

6、标准品：10mg氧化型谷胱甘肽。临用前加入1m蒸馏水，充分溶解，浓度为10mg/mL。

7、标准品稀释:吸取10mg/mL标准品，用蒸馏水稀释至 125ug/mL、62.5ug/mL、31.25ug/mL、15.625ug/mL、     

7.8125ug/mL、3.90625ug/mL.

1、在EP管按下表步骤加样：

2、操作步骤：（在微量玻璃比色皿/1.5ml的EP管内加入下列试剂，勿用96孔板加样。）

三、GSSG含量计算：

1、绘制标准曲线:

以标准管的浓度(μg/mL)为横坐标x，以(ΔA标准-ΔA空白)为纵坐标 y，绘制标准曲线。根据标准曲线。将(A测定-ΔA空白)带入公式计算样本浓度(μg/mL)。

2、GSSG 含量计算:

(1)按蛋白浓度计算:  GSSG含量(μg/mg prot) =XxV样÷(V样xCpr) = X÷Cpr

(2)按样本质量计算:  GSSG含量(μg/g质量) =XxV样÷(V样÷V样总xW) = X÷W

(3)按细胞/细菌数量计算:  GSSG含量(μg/10^cell) =XxV÷(V样÷V样总xN) = X÷N

(4)按液体体积计算:  GSSG含量(μg/mL) =2x

V样总:上清液总体积，1mL;      V样:加入反应体系中上清液体积，20L=0.02mL;   

W:样本质量，g:                Cpr:上清液蛋白质浓度，mg/mL;   

N:细胞/细菌数量，以10计;      2:血浆(血细胞)稀释一倍。

注意事项：

1、若不确定样本中 GSSG 含量的高低，可稀释几个梯度后再进行测量。

2、如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样云量或者稀释样本后再进行测定。

3、因为试剂一中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测定。如需测定蛋白含量，需另取组织。